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介紹重組腸激酶的使用注意事項
2022-04-24 重組腸激酶（Enterokinase,lightchain）是一種高度專一性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶，在Lys的C端水解多肽。它可以將胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐让福部梢詫в羞@個識別序列的融合蛋白切開。由于腸激酶具有高度專一性，水解效率高的特點，它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。腸激酶具有高度專一性，水解效率高的特點，它被廣泛地應(yīng)...
細胞凍存液分類與選擇
2022-04-24 細胞凍存是細胞生物學研究及藥物研發(fā)細胞實驗中需要經(jīng)常面對的常規(guī)操作。隨著細胞越來越嬌，人工越來越貴，各種細胞凍存液應(yīng)運而生，如何從名目繁多的細胞凍存液中選擇變成一個問題。本文從細胞凍存液分類，應(yīng)用場景，使用效果等多方面加以闡釋，希望能對如何選擇細胞凍存液有所助益。一、細胞凍存液的分類從成分劃分（1）滲透性和非滲透性滲透性保護劑分子量小可滲透到細胞內(nèi)，如甘油、DMSO、乙二醇等，其在細胞冷凍存*凝固之前，滲入細胞內(nèi)，降低細胞內(nèi)外溶液中的電解質(zhì)濃度，阻止細胞內(nèi)水分外滲，避免細胞過...
細胞凍存液原理及配制方法
2022-04-22 細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中，及時凍...
PEI轉(zhuǎn)染試劑是非常有潛力的非病毒質(zhì)粒載體試劑
2022-03-28 分子生物學的發(fā)展使得大量致病基因被鑒定，科學家在這些研究成果的基礎(chǔ)上發(fā)展了基因治療。基因治療是利用基因載體將治療基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，進而表達功能蛋白以達到治療的目的。基因治療傳遞DNA面臨的挑戰(zhàn)之一是外源治療基因會被體液和胞外空間的核酸內(nèi)切酶降解。治療基因在目標組織中的選擇性積累、細胞內(nèi)化以及從溶酶體逃逸這些問題對所有核酸治療劑都是需要克服的。DNA必須輸送至細胞核以允許獲得轉(zhuǎn)錄和表達。因此，設(shè)計和制備安全高效的基因載體來壓縮并且保護治療基因以免被核酸內(nèi)切酶降解并延長其在體內(nèi)的...
基因組DNA提取原理說明
2022-03-24 DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學研究的主要對象。所以基因組DNA提取實驗是分子生物學最基本實驗之一。今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時間了還會介紹動物基因組DNA的提取步驟。DNA.RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L.DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細...
蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶
2022-03-21 蛋白酶，顧名思義，降解蛋白的酶，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學，藥理學等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般儲存在-20°C，避光防潮密閉干燥蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類的統(tǒng)稱蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶...
介紹牛血清白蛋白常見的問題解決方法
2022-01-21 牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過1h時，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因為在不含牛血清白蛋白的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...
外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色
2022-01-07 外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破，要將其用于臨床治療，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)面臨很大的挑戰(zhàn)。外泌體（exosome）是細胞分泌囊泡（extracellularvesicles）的一種亞型，存在于生物體液中，并參與多種生理和病理過程。外泌體被認為是細胞間通信的一種新機制，允許細胞交換蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和遺傳物質(zhì)。過去，細胞分泌的外泌體一度被認為只是參與廢物排泄；現(xiàn)在，隨著高通量蛋白質(zhì)組學和基因組學的發(fā)展，外泌體被廣泛認為是生物體內(nèi)細胞間短距...

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